細(xì)菌冷凍干燥機(jī)操作

    細(xì)菌冷凍干燥機(jī)顧名思義是一種用于細(xì)菌、菌種、微生物等凍干保存的真空冷凍干燥機(jī)，也常常被稱為細(xì)菌凍干機(jī)、菌種冷凍干燥機(jī)、微生物冷凍干燥機(jī)。其操作步驟如下：

一、菌株準(zhǔn)備及分裝

    液體培養(yǎng)的菌種，經(jīng)離心收集和用生理鹽水洗滌細(xì)胞，收集的菌體用保護(hù)劑（10ml脫脂牛奶中加1g米孢子粒）懸浮制成菌懸浮液。懸液中菌數(shù)要求達(dá)到108-1010個(gè)/ml為宜。懸液制備完成盡快分裝和凍結(jié)。分裝安瓿時(shí)可用滅菌長(zhǎng)嘴毛吸管或長(zhǎng)針注射器，每管分裝量約0.1-0.2ml（0.3-0.5ml，單管式冷凍管球形裝液區(qū)內(nèi)的裝液量應(yīng)為球體積的一半左右），分裝安瓿管時(shí)間盡量要短，在1-2小時(shí)內(nèi)分裝完畢并且預(yù)凍，分裝時(shí)應(yīng)注意在無菌條件下操作。

二、預(yù)凍

    置于-80℃超低溫冰箱預(yù)凍1-2小時(shí)（也可直接選購(gòu)-80℃低溫實(shí)驗(yàn)室冷凍干燥機(jī)）。

三、 冷凍干燥

1. 將冷凍后的樣品安瓿管置于細(xì)菌冷凍干燥機(jī)上（先開機(jī)預(yù)冷30分鐘以上才開泵），開始冷凍干燥，時(shí)間一般為數(shù)小時(shí)。終止干燥時(shí)間應(yīng)該根據(jù)以下情況判斷：安瓿管內(nèi)凍干物呈酥塊狀或者松散狀；真空度接近空載時(shí)的zui高值；選用1-2支對(duì)照管，其水份與菌懸液同量，視為干燥完結(jié)。（注意：確認(rèn)干燥后，要先開啟冷凍室的進(jìn)氣閥，讓真空釋放，然后停泵，打開冷凍室，將冷凍干燥管取出。）

2. 真空封口

將安瓿管頸部棉塞以下處用強(qiáng)火焰拉細(xì)進(jìn)行熔封。

四、 保藏

   安瓿管保藏在-20℃超低溫冰箱中。

五、 活化

    如果要從中取出菌種恢復(fù)培養(yǎng)，可先用75%酒精將管得外壁消毒，用無菌棉簽沾冷水，在頂部擦一圈，頂部出現(xiàn)裂紋，用挫刀或鑷子頸部輕叩一下，敲下已開裂的安瓿管的頂端，，在安瓿管中加入0.5-1ml液體培養(yǎng)基，慢慢旋轉(zhuǎn)安瓿管，使凍干菌種復(fù)蘇，然后直接接種到瓊脂斜面或涂布平板。

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